我学者首次发现抗HBV末端蛋白杂交瘤细胞系

  本报西安讯日前,第四军医大学基础部免疫学教研室赵玉红实验师等,采用经原核表达的乙肝病毒末端蛋白(HBV-Tp)免疫BALB/c小鼠,通过取其脾细胞与骨髓瘤细胞SPS2/0融合克隆,从而成功地获得被命名为E3mAb、F5mAb和F7mAb并具有稳定分泌抗体的抗HBV末端蛋白杂交瘤细胞系。该杂交瘤细胞系的成功建立,为研究HBV感染的早期诊断及乙肝患者的生物治疗有着重要意义。

  据介绍,乙肝是由HBV感染所引起的全球性传染疾病。该病易于慢性化,并与肝癌的发生发展密切相关。近年来国际兴起的PCR检测新技术,因有某些局限性而不能作为病毒感染的早期指标。因此,研究HBV多聚酶mAb在HBV相关肝脏疾病诊断中的应用,建立抗HBV末端蛋白杂交瘤细胞系,以寻找HBV感染的最佳临床治疗方法,是目前国内外关注的热点和最活跃的新思路。

  研究人员采用经原核表达的HBV-TP免疫BALB/c小鼠,并通过取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,接种培养。在进行筛选和克隆化的基础上,应用ELISA法检测出8个阳性克隆,经进一步扩大培养和反复克隆后,终于从这8个阳性克隆中精确地筛选出了阳性率达100%的3个克隆细胞(即杂交瘤细胞系)。这3株杂交瘤细胞系在100天的连续培养中,其mAb的分泌持续稳定,冻存细胞复苏后仍保持抗体分泌能力,其染色体数为99~116条,均有端着丝粒及标志染色体(中着丝粒染色体),DNA含量均高于SP2/0细胞,其分泌的mAb被分别命名为E3mAb、F5mAb和F7mAb。此外,此3株杂交瘤细胞系经免疫组化染色培养上清抗体效价为1誜100,腹水为1誜1000,其相应抗原在乙肝病毒及肝硬变组织中呈高表达(80%),而在正常肝组织中未见阳性反应,其抗原主要分布于细胞质内。提示该3株抗乙型肝炎病毒末端蛋白杂交瘤细胞分泌的mAb具有特异亲合性,其mAb分泌稳定,特异性强。

  据赵玉红介绍,HBV-P0L抗原及抗体可在多数HBV感染患者血清中出现,尤其是它们可出现于其他HBV血清学指标阴性的HBV感染的个体血清中,提示这一指标在某些病例中可能是惟一反映HBV感染或体内HBV低水平复制的重要标记物。该研究所获得的3株杂交瘤细胞系表明,阻断HBV-P0L基因编码的末端蛋白TP,对乙肝的防治具有重要的应用意义,为临床对HBV-TP为靶蛋白的主动性免疫治疗及基因治疗奠定了基础。

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