我国基因工程抗体研究进展和问题

 　　20世纪80年代以前，用抗原免疫动物获得抗血清是人们得到抗体的主要途径。1975年杂交瘤技术问世，为所有需要制备和使用特异性抗体的研究领域提供了全新的手段。随着分子生物学技术的发展和抗体基因结构的阐明，DN A重组技术开始用于抗体的改造，出现了各种形式的基因工程抗体。在日前召开的新一代生物技术药物国际论坛上，军事医学科学院基础医学研究所的沈倍奋院士介绍了近二十年来我国抗体研发的概况。

　　单克隆抗体的研究进展目前根据制备原理和方法，把抗体分为第一代多克隆抗体、第二代单克隆抗体和第三代基因工程抗体3类。20世纪 80年代初我国就开始了单克隆抗体的研制，在当时条件极差的情况下，科研人员克服重重困难，获得了一批针对下列抗原的单克隆抗体。这些抗原主要有：细胞表面抗原，如血型抗原、白细胞分化抗原、组织相容 性抗原、膜受体等；肿瘤相关抗原，如胃癌、肝癌、大肠癌、结肠癌、肺癌、卵巢癌、脑胶质瘤、乳腺癌等；病原微生物：病毒抗原，如流感病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、出血热病毒、登革热病毒、新城疫病毒等；细菌抗原，如福氏 2a痢疾杆菌脂多糖、膜蛋白抗原、人型和牛型结核杆菌、霍乱弧菌、绿脓杆菌、沙门氏菌等；寄生虫抗原，如恶性疟原虫、血吸虫、弓形虫、旋毛虫、细粒棘球绦虫；微生物毒素抗原，如黄曲霉毒素、大肠杆菌内毒素、肉毒类毒素、破伤风类毒素等；其他抗原，如细胞因子、酶、血浆蛋白、免疫球蛋白、补体、激素等。上述抗原的单克隆抗体大部分用于实验研究，还有一部分用于检疫、疾病诊断、预后判断等。

　　1987年，我国将抗体研制列入“863计划”生物技术领域。当时集中了一批优势单位，开始了针对肝癌、胃癌、肺癌等实体瘤的导向药物研究和白血病导向治疗研究，同时也开展了高效“弹头”药物的研究和人-人单抗、嵌合抗体的研究。经过几年努力，在实验室和动物模型上评价了以鼠抗体为载体的同位素-抗体、药物-抗体和毒素-抗体等导向药物的治疗作用，并逐步走向临床。如抗T细胞免疫毒素经国家药品监督管理局批准后，用于异基因骨髓移植时清除供体骨髓中成熟T细胞，以预防移植物抗宿主病；131I-标记的抗人肝癌单抗Hab18F(ab，)2，用于放射免疫显像和作为肝癌治疗制剂；

　　99mTc标记的抗人小细胞肺癌单抗2F7(Fab)2用于放射免疫显像。

　　基因工程抗体的研究进展

　　对于基因工程抗体的进展，沈院士介绍，20世纪80年代中期，我国开始研制基因工程抗体。最初是在几个单位开展人-鼠嵌合抗体的研究，成功获得了抗人CD3人-鼠嵌合抗体。以后又有单位利用CDR区移植的方法，获得抗CD3的改形抗体(或称重构抗体)。随着基因操作技术的发展和普及，许多实验室成功地获得针对各种抗原的人-鼠嵌合抗体和单链抗体。20世纪90年代后，又开始了双特异性抗体和其他小分子抗体的研制，如SZ-51Hu-scu PA双特异性抗体，它兼有抗人活化血小板特性和纤溶酶原激活剂特性的双重功能，成为导向溶栓剂，与单独的uPA进 行比较，溶栓效率提高4倍。

　　随着基因工程抗体技术的发展，在我国有些实验室开始了噬菌体抗体库的构建。用抗体库技术可直接制备人源抗体，例如利用被病原微生物感染的病人外周血细胞制备噬菌体抗体库，用特定抗原进行筛选，获得抗乙肝表面抗原、甲肝病毒的人源抗体。抗体库技术也被用于抗体性能改良，例如用链替换方法，以亲本抗体的一条链(轻链)与另一条链 ( 重链)的文库组合，构建抗体库，筛选高亲和力的克隆，再固定重链，用同样方法选择具有更高亲和力的轻链。一些特异性好、有应用前景的鼠抗体，利用抗原表位定向选择(EGS)方法，以鼠单抗可变区为模板，经噬菌体展示技术，通过抗原导向，筛选能够模拟鼠单抗可变区、结合相同抗原决定簇的人抗体，经这一方法获得人源抗体。国内也有实验室在计算机辅助设计下，将鼠抗体表面氨基酸残基“人源化”，主要将鼠 Fv段表面暴露的骨架区残基中与人Fv不同者改为人源性，使Fv的表面人源化，但仍保留其与抗原结合的特性。

　　研制中存在的主要问题二十多年来，我国在工程抗体的研制方面取得很大成绩。沈院士说，目前存在的问题是，有很多试剂型抗体或诊断用抗体进入市场，而治疗用抗体只有少数进入临床试验。分析主要原因，一是工程抗体表达量低。国内很多实验室，真核细胞中抗体表达量在1 毫克／升以下，很难用于生产。仅个别实验室在对载体进行改造后，抗体表达量达到40毫克／升。二是动物细胞规模化培养技术还不成熟，与国外相比存在很大差距。由于技术和经费等原因，我们动物细胞培养的规模最大为50升，培养方式大多是采用微载体，悬浮批次和悬浮灌流尚属空白。

　　上述问题成为阻碍我国抗体药物开发和产业化的瓶颈，因此，“十五”计划中列入了“动物细胞表达产品的大规模高效培养技术平台”等专题，希望经过3～5年，我国自制的抗体药物能进入市场。 sina.net