基因编辑神器能否“助力”治愈乙肝

　　近日，李兰娟院士在浙大一院庆祝感染科成立60周年大型肝病讲座和义诊中表示：“再过十几年的时间，我们要让中国摘掉‘乙肝大国’的帽子。”事实上，为了能够彻底治愈乙肝，很多科研人员都在从事这方面的研究。近期，风靡科学界的基因编辑神器CRISpR也在该领域发挥了至关重要的作用。

　　Scientific Reports(9月3日)

　　9月3日，在Nature子刊《Scientific Reports》上发表的一篇论文中，研究人员在HBV基因组的S和X区中确定了交叉基因型保守的HBV序列，可被Cas9切口酶靶定进行特异性和有效的切割。这种方法不仅能破坏细胞系中的游离cccDNA和染色体整合HBV靶位点，而且也能破坏慢性感染和新感染肝癌细胞株中的HBV复制。这些数据表明，可以使用CRISPR/Cas9切口酶，作为HBV感染的新型治疗策略。

　　在这项研究中，研究人员调查了改进的CRISPR/Cas9切口酶系统，可选择性地靶定和灭活记者细胞系和慢性感染的肝癌细胞株中的游离以及染色体整合的HBV序列。研究人员证明，HBV的S和X基因的两个高度保守区域，可以用于Cas9n介导的HBV灭活，从而支持一个概念：设计酶的进一步临床开发，最终可能根除感染患者体内的HBV。[文献]

　　World J Gastroenterol(8月28日)

　　8月28日，发表在《World J Gastroenterol》杂志上的一篇论文中，研究人员用双gRNAs导向CRISPR/Cas9系统抑制了乙型肝炎病毒复制。论文的通讯作者是北京大学医学部病原生物学系鲁凤民(Feng-Min Lu)教授，其主要从事病毒性肝炎的实验室诊断、HBV感染相关肝癌发病机制等研究。

　　在这篇文章中，研究人员评估了CRISPR/Cas9系统清除HBV A-D基因型的基因组的潜力。他们总共设计出了对抗HBV A-D基因型的15种gRNAs。选出了覆盖HBV调控区域的11个双gRNAs组合。通过测量HBV表面抗原(HBsAg)或培养物上清液中的E抗原(HBeAg)检测了每种gRNA和11个双gRNAs抑制HBV(A-D基因型)复制的效力。利用PCR和测序方法检测了在共转染双gRNAs和HBV表达载体的HuH7细胞中HBV表达载体的破坏情况。并利用KCl沉淀、PSAD消化、滚环扩增结合定量PCR的方法在HepAD38细胞中检测了cccDNA的破坏情况。并评估了这些gRNAs的细胞毒性。

　　结果显示所有gRNAs都可以显著减少培养物上清液中HBsAg或HBeAg生成，这取决于gRNA对抗的区域。所有的双gRNAs都可以有效的抑制HBV A-D基因型生成HBsAg和/或HBeAg，与单gRNA相比，双gRNAs抑制HBsAg和/或HBeAg生成的效力大大提高。此外，通过PCR直接测序技术，他们证实了这些双gRNAs可通过除去两gRNAs切割位点之间的片段来破坏HBV表达模板。更重要的是，gRNA-5和gRNA-12组合不仅可以有效抑制HBsAg和/或HBeAg生成，还能够破坏HepAD38细胞中的cccDNA储存库。

　　这些结果表明了，CRISPR/Cas9系统可以有效破坏HBV表达模板，且没有明显的细胞毒性。它有可能是在慢性HBV感染患者中根除持续存在的HBV cccDNA的一种潜在的方法。[文献]

　　Scientific Reports(6月2日)

　　6月2日，发表在《Scientific Reports》杂志上的一项新研究中，麻省理工学院的研究人员利用CRISPR/Cas9 系统，对受到感染的哺乳动物肝细胞进行基因组编辑，从中删除了乙肝病毒(HBV)DNA。该研究小组靶向切割了HBV病毒共价闭合环状DNA(cccDNA)的一些特异位点。